氨苄青霉素（Ampicillin，又称氨苄西林、安比西林）是一种半合成的氨基青霉素类抗生素，由6-氨基青霉烷酸（6-APA）衍生而来。它是第一个被发现对革兰氏阴性菌也有显著活性的青霉素类抗生素，标志着青霉素谱系扩展的重要突破。其化学名为(2S,5R,6R)-6-[(R)-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-3,3-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-甲酸，分子式为C₁₆H₁₉N₃O₄S·nH₂O，市售常见形式包括无水物和三水合物。

在分子生物学领域，氨苄青霉素最广泛的应用是作为选择性抗生素：携带氨苄青霉素抗性基因（bla基因，编码β-内酰胺酶）的质粒转化入大肠杆菌等受体菌后，可赋予菌株在含氨苄的培养基中生长的能力，从而实现对阳性重组子的高效筛选。为方便操作，实验室通常将氨苄青霉素配制成100 mg/ml的储备液，使用前按比例稀释至工作浓度。

氨苄青霉素属于β-内酰胺类抗生素，其核心作用机制是干扰细菌细胞壁肽聚糖的交联过程，从而抑制细胞壁的合成。具体而言，氨苄青霉素与细菌细胞膜上的青霉素结合蛋白（PBPs）共价结合，抑制转肽酶活性，阻止肽聚糖链之间的交联，导致细胞壁结构不完整。在等渗环境中，细菌因无法抵抗细胞内渗透压而破裂死亡。由于哺乳动物细胞没有细胞壁结构，氨苄青霉素对宿主细胞具有选择性毒性，这一特性使其成为临床上和实验中广泛使用的安全抗生素。

氨苄青霉素对革兰氏阳性菌及部分革兰氏阴性菌均有效，对大肠杆菌（Escherichia coli）、流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）、沙门氏菌（Salmonella）等多种临床常见病原菌具有杀菌作用。

氨苄青霉素储备液（100 mg/ml）的推荐工作浓度因实验目的和质粒类型而异。在大肠杆菌常规培养（LB液体或固体培养基）中，标准工作浓度为50–100 μg/ml，对应储备液稀释比例约为1:1000至1:2000。其中，最常用的终浓度为100 μg/ml，即每100 ml培养基中加入100 μl储备液（千分之一比例）。对于不同拷贝数的质粒，工作浓度有所区别：松弛型（高拷贝）质粒推荐使用60 μg/ml，而严紧型（低拷贝）质粒则推荐20 μg/ml；若浓度过低，会增加卫星菌落（satellite colonies）出现的风险。此外，氨苄青霉素在植物细胞筛选中推荐浓度为20–200 μg/ml，在动物细胞培养抗菌应用中的推荐浓度为50–1000 μg/ml，两者均需要根据具体细胞系进行优化。

配制含氨苄青霉素的LB琼脂平板时，必须严格控制温度。氨苄青霉素对热敏感，需将高压灭菌后的培养基冷却至55℃以下（以不烫手为度）再加入抗生素，轻轻摇匀后迅速倒板；温度过高会导致抗生素降解失效。整个操作应在超净工作台中进行，使用无菌容器和器具，确保无菌环境。若平板上出现氨苄抗性筛选的"卫星菌落"（satellite colonies），通常表明抗生素浓度不足或平板保存时间过长，此时应适当提高工作浓度或使用新鲜配制的平板。

携带氨苄青霉素抗性基因（bla，编码β-内酰胺酶）的质粒是最常用的分子克隆载体之一，如pUC系列、pBluescript系列、pET系列等。β-内酰胺酶可水解氨苄青霉素的β-内酰胺环，使之失效。转化实验的标准流程如下：首先将连接产物或质粒转化至感受态大肠杆菌（如DH5α、JM109等）中；然后将转化菌液涂布于含100 μg/ml氨苄青霉素的LB琼脂平板上，37℃倒置培养12–16 h；仅携带氨苄抗性质粒的阳性克隆可在平板上形成单菌落，未转化的菌株则被抑制生长；最后挑取单菌落接种至含相应抗生素的LB液体培养基中扩大培养，即可进行质粒提取、酶切鉴定和测序验证。

LB（Luria-Bertani）培养基的基础成分为：1%胰蛋白胨（10 g/L）、0.5%酵母提取物（5 g/L）、1%氯化钠（10 g/L）；配制固体培养基时另加1.5%琼脂（15 g/L）。

含氨苄青霉素的LB培养基配制步骤如下：

LB液体培养基：先配制LB液体培养基，经高压灭菌（121℃，20 min）后冷却；使用前按1:1000的比例加入氨苄青霉素储备液（100 mg/ml），使终浓度为100 μg/ml。

LB琼脂平板：配制LB固体培养基并高压灭菌；冷却至约50–55℃后加入氨苄青霉素储备液，混匀后立即倒板；待平板凝固后，4℃避光保存，建议在1–2周内使用。

目前市场上也有即用型含氨苄青霉素的LB平板和液体培养基产品，可直接使用，方便快捷。

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