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发布日期:2026/7/29 16:21:00

马铃薯葡萄糖琼脂(Potato Dextrose Agar, PDA)是微生物学中最经典、使用最广泛的真菌培养基之一。马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)是以马铃薯浸出液为基础、以葡萄糖为主要碳源、以琼脂为凝固剂的一种通用型固体培养基,在真菌、酵母和部分放线菌的分离、培养、计数和保藏中发挥着不可替代的作用。美国公共卫生协会(APHA)和美国食品药品监督管理局(FDA)均推荐PDA用于食品和乳制品中酵母和霉菌的平板计数检测;美国药典(USP)亦将其列为非无菌药品微生物计数测试的推荐培养基之一。近年来,PDA的配方优化和应用领域仍在不断拓展,从真菌学延伸到放线菌和海洋微生物研究,展现出持续的学术价值。

PDA的核心成分是马铃薯提取物(提供天然营养)、葡萄糖(碳源)和琼脂(凝固剂)。基础配方分两种:实验室自制的用去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15–20g、水1L,pH约5.6–6.8;商品粉末级用马铃薯浸出物4g、葡萄糖20g、琼脂15g/L,pH 5.6±0.2。

配方参数在不同文献中有所差异:马铃薯用量通常为200g,少数用250g,有的不去皮直接切片使用;琼脂浓度在15–20g/L之间,高浓度便于表面接种,低浓度利于菌丝扩散;pH一般天然为5.6–6.0,部分配方调至7.0或8.0;部分配方添加NaCl调节渗透压,但真菌培养中非必需。

变体配方包括:含氯霉素(0.1g/L)或链霉素(0.03g/L)的抗生素PDA,用于抑制细菌;酸性PDA(pH调至约3.5),用于酵母和霉菌计数;以及添加33g/L人工海盐的海盐PDA,用于模拟海洋环境培养真菌。

一、配制与灭菌工艺

1.1 传统制备流程

自制PDA的标准流程(以1L计)为:马铃薯洗净去皮→切成均匀薄片(约200g)→中火煮沸至玻璃棒能轻松夹断马铃薯片→纱布过滤收集滤液→加入葡萄糖和琼脂→补加蒸馏水定容至1L→混合均匀→分装灭菌。在以6L量级批量制备时,可使用1.2kg去皮马铃薯和108g琼脂粉,采用相同的煮制与过滤工艺。

1.2 灭菌条件

PDA培养基的标准灭菌条件为高压蒸汽灭菌法:121℃灭菌20-25min(或115℃灭菌20min)。微波间隙灭菌法也被研究,在P50强度下处理10min、载量200mL灭菌效果较好且营养成分破坏较少。灭菌后应将培养基冷却至45-50℃后倾倒平板,至少凝固30min后使用。

二、理化与微生物学特性

2.1 营养成分特性

PDA的营养基础来自马铃薯浸出液,富含天然碳水化合物(如淀粉)、可溶性蛋白质、B族维生素和矿物质元素,为微生物提供全面而复杂的营养成分。葡萄糖作为快速可发酵碳源,支持霉菌和酵母的迅速生长。琼脂提供固态支撑面,其浓度影响培养基的硬度与可操作性。

2.2 典型微生物培养特性

真菌培养:在PDA上,不同真菌呈现出各异的菌落形态。烟曲霉在PDA上第4天形成较大的浅灰色圆形菌落。长毛拟青霉SP053菌株在PDA上培养15天后呈现不规则形状、表面粗糙、颜色较浅的菌落特征。2018年一项比较12种培养基的研究显示,茄链格孢(Alternaria solani)在PDA(T9)上生长良好。

培养条件:真菌培养通常在PDA平板上划线接种或倾注法接种后,于25-30℃、增湿条件下培养至7天。纯种保存可采用PDA斜面,在相同条件下接种培养。对于系统性真菌感染的分离诊断,建议分别在25-30℃和35±2℃各培养一套培养基,每周检查至少一次,阴性结果需保留4-6周。

三、选择性改良策略

在PDA基础上发展出多种改良型选择性培养基,主要包括:① 酸性PDA,添加无菌酒石酸将pH调至约3.5,用于抑制细菌、富集酵母和霉菌;② 抗生素PDA,添加氯霉素(0.1g/L)、链霉素(0.03g/L)或金霉素/四环素,用于抑制细菌、允许真菌生长;③ 海盐PDA,添加人工海盐33g/L,用于模拟海洋环境培养海洋真菌;④ 酵母提取物PDA,添加酵母提取物1–3g/L,用于促进放线菌气生菌丝生长。

四、现代应用与最新研究进展

4.1 食品与药品微生物检测

PDA广泛应用于食品、乳制品和化妆品中酵母菌和霉菌的计数与检验。FDA的细菌学分析手册(BAM)、AOAC标准方法和USP微生物限度检查法均推荐PDA作为基本培养基。

4.2 植物病理学中的真菌分离

在植物病害诊断和病原真菌分离中,PDA是最常用的基础培养基之一。从油茶炭疽病、黑豆炭疽病、茄子采后真菌等病害研究中,PDA均作为病原菌分离培养和菌落形态观察的标准基质。

4.3 放线菌培养的优化

2025年一项发表于Microorganisms的研究对PDA配方进行系统优化用于放线菌(Streptosporangium sp.)培养。通过中心复合旋转设计实验,确定了最适配方:葡萄糖10g/L、酵母提取物1-3g/L、pH 5.7-7.2、温度24-32℃,成功将放线菌的孵育时间缩短并获得了完整的气生菌丝生长。

4.4 海洋真菌次级代谢产物研究

2025年一项针对海绵附生真菌的研究中,在PDA基础上添加33g/L人工海盐,成功培养了Penicillium sp. G5A-11,并使用对应的PDB液体培养基(不加琼脂、同样含海盐)进行大量发酵,用于次级代谢产物的分离和鉴定。

4.5 真菌培养组学方法学

2023年中国疾病预防控制中心的研究比较了PDA、沙保罗葡萄糖琼脂(SDA)和Pan-fungal培养基对烟曲霉和耳念珠菌的培养效果,发现第4天时PDA上形成较大的浅灰色圆形菌落,表明PDA是通用型真菌培养组学中的有效基础培养基。

马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基自问世以来,凭借其配方简洁、营养全面、适用广泛的特点,一直是真菌学、植物病理学、食品微生物学和临床微生物学中不可或缺的基础工具。从经典的200g土豆配方到如今优化放线菌培养、海洋微生物研究和含抗生素选择性配方,PDA不断展现出其强大的可塑性和适应性。深入理解PDA的配方原理、配制工艺和应用场景,对于微生物学教学、科研和产业质量控制均具有重要意义。

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