分支聚乙烯亚胺(branched polyethylenimine, bPEI)是一种阳离子水溶性聚合物,具有高阳离子电荷密度,其基本重复单元由一个氮原子和两个碳原子构成,分子式为 (C₂H₅N)n 或 H(NHCH₂CH₂)nNH₂。该材料通过氮丙啶(aziridine/ethyleneimine)的酸催化聚合制备而成,呈高度支化的三维网络结构,氨基类型包含一级(-NH₂)、二级(-NH-)和三级(-N<)氨基,比例约为1:2:1,商用分子量范围从600 Da至2,000,000 Da不等。物理性质方面,该材料外观为无色至淡黄色黏稠液体,具有特征性的氨味,密度为1.029-1.038 g/cm³(适用于分子量约1200的类似物),粘度为3500-7500 cps(适用于分子量约1200的类似物),可溶于水、低级醇、乙二醇和四氢呋喃(THF),建议室温保存。
分支聚乙烯亚胺(bPEI)在基因递送领域的研究始于1995年Zabner等人于PNAS发表的开创性论文,首次系统研究了PEI作为基因和寡核苷酸递送载体的潜力。该研究发现,PEI每第三个原子是可质子化的氨基氮,使其在生理pH下成为有效的"质子海绵",在多种细胞系和原代细胞中的转染效率与脂代聚合物相当甚至更优,且仅在远高于最佳转染浓度的条件下观察到细胞毒性,还可将寡核苷酸递送至胚胎神经元,实现近乎100%的核标记且无毒性。1996年,该团队进一步研究了不同分子量PEI(25-kD、50-kD和800-kD)在成年小鼠脑内的转染效率,发现25-kD聚合物获得最高转染水平,离子电荷比最接近中性的DNA/PEI复合物效果最佳,使用CMV-luciferase构建在最佳条件下可获得高达0.4×10⁶ RLU/μg DNA的转染表达,且在皮层神经元中持续表达超过3个月。
关于低分子量PEI(600 Da)的研究方面,2006年Cho等人(韩国科学技术院)研究了低分子量支化PEI(Mw 600)与Pluronic F127末端共轭的共聚物,发现PEI改性的Pluronic共聚物在水溶液中形成与未改性Pluronic相似的胶束结构,PEI修饰增加了胶束尺寸并提高了临界胶束浓度(CMC),可作为添加剂增强预形成的聚电解质复合纳米颗粒的基因转染效率;2016年Yoshii等人(日本化学与药学会)利用等温滴定量热法(ITC)和石英晶体微天平(QCM)研究了低分子量支化PEI(600 Da)与线性DNA的结合,该研究填补了PEI作为载体作用基础理解方面的空白。
在材料合成与应用拓展方面,2009年Wang等人(华东理工大学)以低分子量支化PEI(MW = 600和1200)为起始原料,通过聚(N-琥珀酰亚胺)(PSI)的开环反应合成了新型类PEI阳离子聚合物;2023年Casper等人于J Control Release发表的综述总结了PEI在基因治疗中的现状和临床应用,指出PEI作为一种非病毒核酸递送试剂因其高效性和低毒性被广泛应用。
分支聚乙烯亚胺(bPEI)的分子量测定主要采用两种技术:光散射法(LS)和凝胶渗透色谱法(GPC)。光散射测定得到的重均分子量(Mw)约为800 Da,反映了溶液中聚合物链的整体质量加权平均值;凝胶渗透色谱测定得到的数均分子量(Mn)约为600 Da,提供基于聚合物分子数量的平均分子量。Mw与Mn之间的差异(Mw/Mn ≈ 1.33)反映了支化PEI的分子量分布特性,表明其具有中等程度的多分散性。这两种方法互为补充,共同提供了材料分子量特征的完整信息。
bPEI作为基因转染载体的主要应用是与质粒DNA形成复合物(polyplexes),并通过内体逃逸机制实现DNA的胞内递送。低分子量PEI(600 Da)具有更低毒性但转染效率相对较低的特点,使其在需要降低细胞毒性的应用场景中具有优势,但同时也需要在转染效率与细胞毒性之间进行权衡。
在纳米载体构建领域,bPEI可用于包覆石墨烯氧化物纳米颗粒和包覆介孔二氧化硅纳米载体,实现核酸与药物的联合递送。这种包覆策略能够有效提高纳米载体的稳定性,并通过PEI的阳离子特性促进细胞摄取。
在材料功能化方面,bPEI可用于纤维素醋酸酯纤维上的氨基接枝涂层、聚合物表面改性以及生物材料表面功能化。通过引入氨基基团,可以显著提高材料表面的亲水性和反应活性,为后续的功能分子接枝提供反应位点。
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