凝胶红核酸染料(GelRed)作为一种独特的花菁类核酸染料,其分子结构呈现为链式油性大分子,分子式为 C₆₀H₇₂I₂N₈O₅,分子量为 1239.1。这种特殊的化学结构设计赋予了 GelRed 一系列优异特性:首先,其油性大分子结构使其无法穿透细胞膜进入活体细胞内,从而在凝胶染色浓度下表现出无诱变性,安全性显著高于传统染料;其次,GelRed 具有高亲和力,能够结合于所有双链 DNA(dsDNA)双螺旋的小沟区域,其荧光信号强度与双链 DNA 的数量直接相关。在光谱特性方面,GelRed 与溴化乙锭(EtBr/EB)几乎具有相同的光谱特性,可直接替换 EtBr 而无需更改现有成像系统,适用于紫外凝胶成像系统(312 nm)或蓝光激发装置,能发出明亮的红色荧光信号,信噪比高且背景低。此外,GelRed 完美兼容所有常用的电泳缓冲溶液,为实验操作提供了极大的便利。
凝胶红核酸染料的染色方法主要分为胶染法(前染)和泡染法(后染)。胶染法是在制胶过程中直接加入 GelRed 染料,具体操作步骤为:首先按常规方法配制琼脂糖凝胶(常用浓度为 1%-2%),然后在熔化的凝胶中加入 GelRed 储液,通常每 50 mL 凝胶加入 5 μL,轻轻摇匀确保染料分布均匀后倒入凝胶槽,插入梳子静置凝固,待电泳分离完成后可直接在凝胶成像系统中观察。该方法的优点是操作简便、省时、染料用量少且背景低。泡染法则是在电泳完成后将凝胶浸入染色液中,操作时先将 10,000×储液稀释至 3×染色液,然后将凝胶浸没于稀释后的染色液中进行振荡染色,室温振荡约 30 分钟即可完成,也可加热至 70°C 孵育 10 分钟以加速染色,最后直接观察或进行成像分析。泡染法的优点在于无需重新制胶、染色液可重复使用 3 次且染色效果均匀。
凝胶红核酸染料在DNA染色应用方面表现优异,研究验证表明其可用于结直肠癌患者外周血总DNA及PCR扩增产物的染色,包括APC基因外显子15、hMLH1、MSH-2等基因片段的检测。GelRed能够有效可视化DNA,其染色结果与传统的溴化乙锭(EtBr)染色方法相似,且具有高度可重复性,因此被推荐用于常规DNA样本的染色工作。
在RNA染色应用方面,GelRed同样适用。它可用于单链DNA或RNA的染色和可视化,适用于各种片段大小的核酸样本。其染色效果均匀,定量准确,能够满足不同实验对核酸染色的需求,为RNA研究提供了可靠的检测手段。
在浓度使用方面,GelRed的添加量可根据凝胶体积灵活调整。当配制50 mL凝胶时,建议加入5 μL GelRed储液,最终浓度为1:10,000;配制100 mL凝胶时,则加入10 μL储液,同样保持1:10,000的稀释比例。这种浓度配比既保证了染色效果,又避免了染料过饱和现象。
染色效果的观察也较为便捷,最佳观察时间为染色后30分钟,此时即可在成像系统中进行观察。GelRed染色无需额外的脱色或冲洗步骤,简化了操作流程,且能够呈现出清晰的条带,核酸迁移率不受影响,确保了实验结果的准确性。
GelRed核酸染料作为一种安全、高效、高灵敏度的荧光核酸染色剂,在分子生物学研究中展现出重要价值。其独特的化学结构设计使其在安全性能上远超传统溴化乙锭染料,同时保持了与EtBr相当的光谱特性和染色效果。胶染法和泡染法的灵活选择使其能够适应不同的实验需求,而其环保特性和简便的操作流程使其成为实验室的理想选择。随着技术的不断进步和应用的不断拓展,GelRed核酸染料将在未来核酸分析领域发挥更加重要的作用。
本文引用地址:https://www.perfemiker.cn/product/1417373.html
联系方式:4006087598
沪公网安备31011402010658号