PBS 缓冲液(Phosphate Buffered Saline)是一种平衡盐溶液,常用于细胞培养、分子克隆和免疫组化等实验。0.01M PBS 是 1×工作液的浓度。
根据实验标准配方,配制 0.01M pH 7.2 无菌 PBS 缓冲液需要精确称取磷酸二氢钾 (KH₂PO₄)、磷酸氢二钠 (Na₂HPO₄)、氯化钠 (NaCl) 和氯化钾 (KCl) 四种盐类试剂,通常采用 8.1 mM Na₂HPO₄、1.5 mM KH₂PO₄、137 mM NaCl 和 2.7 mM KCl 的配方,将其溶解于少量去离子水中混合后补足体积至 1 L,并使用 pH 计测定并微调至 7.2 (可滴加 1N HCl 或 NaOH 调节),随后通过 0.22 μm 膜过滤或高压灭菌(121℃,15-20 分钟)除菌,最终将配制好的 PBS 在 2-8℃ 冰箱中保存以备长期使用。
PBS缓冲液因其能够在生理pH范围内保持pH稳定,且为等渗溶液,广泛应用于细胞培养、分子生物学及免疫实验等多个生物实验领域。
在细胞培养与生物学实验中,PBS常用于细胞洗涤,能够有效去除血清中的酶抑制剂,防止细胞与培养基中成分发生不可逆的结合;同时,在组织切片或细胞悬液的运输过程中,PBS也能维持细胞的渗透压平衡和pH稳定。
在分子生物学与免疫实验中,PBS常作为抗原修复液(Antigen Retrieval Buffer)使用,能够显著提升胞浆包膜着色效果,提高染色质量和信号强度;在Western Blot与ELISA实验中,PBS作为洗涤缓冲液,能够有效分离结合和未结合的试剂或血清成分,降低背景噪声;此外,在分子克隆实验中,PBS也常用于稀释酶反应体系,维持酶的活性环境。
在使用PBS缓冲液时,需要注意离子选择(不同规格的PBS可能不含钙镁离子,以避免在某些实验中产生干扰)、pH稳定性(配制后若出现pH偏差,需使用盐酸或氢氧化钠进行微调)以及温度敏感性(PBS溶液的pH受温度影响较大,使用前应在实验室环境温度下进行测量和调整)。
参考文献:
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1× PBS – 8.1 mM Na₂HPO₄, 1.5 mM KH₂PO₄, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, pH 7.2。
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PBS (pH 7.2) – High Quality and sterile solution for Research。
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0.01M PBS pH 7.2 – Designed for a wide range of Further Manufacturing and Research applications。
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0.01M PBS (powder, pH7.2-7.4) – Product description and usage。
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