质粒小量抽提试剂盒(通用型)

质粒小量抽提试剂盒(通用型)

       质粒小量抽提试剂盒(通用型) (Plasmid Mini Preparation Kit for All Purpose, Plasmid Miniprep Kit for All Purpose)是一种用于从大肠杆菌中进行小量质粒快速抽提的通用型离心柱式试剂盒。

本试剂盒不仅适用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109和XL-1 blue等，也适用于EndA+菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101等，能有效避免EndA+菌株中高丰度核酸酶的污染，并适用于从糖类修饰水平高的野生菌株中提取质粒。

野生型大肠杆菌中表达Endonuclease I，能切割并降解双链DNA。编码Endonuclease I的基因是endA，如果endA突变失活，其基因型会被标注为endA1，相应的突变菌株被称为EndA-菌株，而野生型菌株则被称为EndA+菌株。常见的EndA-和EndA+菌株参见附表1。从EndA+菌株中抽提的质粒，微量核酸酶和质粒结合而容易被共纯化，导致容易降解，而本试剂盒增加了特殊的洗涤步骤(核酸酶洗涤液溶液PB洗涤)，可以有效避免EndA+菌株中抽提获得的质粒容易降解的问题(参考图1)。

图1. 使用溶液PB可以使从EndA+菌株JM110中抽提的质粒不易降解，而对于EndA-菌株DH5α中抽提的质粒没有影响。使用本试剂盒时，如上图所示，在使用和不使用溶液PB时的质粒得率一致。但对于EndA+菌株JM110，不使用溶液PB时从其中抽提获得的质粒在内切酶缓冲液Buffer Y中37ºC孵育1小时后会全部降解，而使用溶液PB时同样孵育1小时就不会降解。对于EndA-菌株DH5α无论是否使用溶液PB，抽提获得的质粒的都很稳定。

本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，12个样品只需不足30分钟即可完成。

每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20微克。每个纯化柱可用于抽提1-5毫升用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD260和OD280比值也会因菌种不同等原因而略有波动。

本试剂盒抽提所得到的质粒可直接用于转染细胞，DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等。本试剂盒在使用溶液PB的情况下，获得的质粒的纯度更高，内毒素含量低，总体上转染细胞的效率会显著提高。

包装清单：

保存条件：
室温保存，一年有效。

注意事项：
第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液I (悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后4ºC存放。
第一次使用前请根据说明书和瓶上的标示，在溶液IV (洗涤液)中加入相应体积的无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
温度较低时，溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37ºC水浴加热溶解，混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。
溶液II使用完后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。
溶液II有强碱性，溶液II、溶液III和溶液IV对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。